TAMs（肿瘤相关巨噬细胞）浸润促进食管癌（EC）的进展。然而，其潜在机制仍不清楚。近日，Journal of Experimental & Clinical Cancer Research期刊（IF11.3）在线发表了一篇题为Tumor-associated macrophage-derived exosomes LINC01592 induce the immune escape of esophageal cancer by decreasing MHC-I surface expression的研究论文。该研究发现TAMs和EC之间通过LINC01592/E2F6/NBR1/MHC-I轴存在显著的分子相互作用，从而促进恶性肿瘤的进展。这表明，针对该轴的治疗干预可能为该疾病的治疗带来希望。

 

 

首先，研究人员使用THP1细胞极化成M2-TAMs，以模拟TAMs。结果发现，与M0-Exos相比，M2-Exos显著抑制了T细胞介导的肿瘤细胞杀伤。然后将CD8+ T细胞与M2-Exos-EC细胞进行体外共培养，并检测CD8+ T细胞的生长以及IFN-γ、TNF-α和Gzmb的表达。结果显示，CD8+ T细胞表现出较低的TNF-α、IFN-γ和Gzmb表达水平和生长。此外，在皮下异种移植模型中，接受M2-Exos注射的小鼠肿瘤体积比接受M0-Exo注射的小鼠肿瘤体积有统计学意义的增加，并且M2-Exos显著降低了移植动物癌症样本中CD8+蛋白的表达。以上结果表明，从M2-TAM中分离得到的外泌体明显抑制了EC细胞中CD8+ CTL细胞介导的抗肿瘤免疫。

 

Fig1. M2-TAMs源性外泌体促进食管癌免疫逃逸

 

接下来，为了检测TAMs中与外泌体相关的lncRNAs，研究人员对M0-Exos和M2-Exos进行了lncRNA分析。结果发现LINC01592是一个突出的非编码RNA。随后，研究人员检测了细胞外的LINC01592。结果发现，单独添加RNase A的M2-TAM在条件培养基（CM）中未显示LINC01592水平的变化。然而，在Triton X-100和RNase A处理后，CM 中的LINC01592水平下降。此外，外泌体中的LINC01592水平与CM中的相同。表明外泌体是细胞外LINC01592的主要转运体。FISH和亚细胞分离显示，LINC01592位于细胞核和细胞质中，主要位于EC细胞的细胞核中。之后，研究人员将phalloidin标记的Eca-109细胞与PKH26标记的外泌体孵育。结果发现，经孵育的Eca-109细胞表现出phalloidin脂质染料和PKH26荧光的共定位，从而证明了外泌体的有效吸收。以上结果表明，M2分泌的LINC01592通过外泌体转运到EC细胞。

 

Fig2. M2-TAMs分泌的LINC01592被转移到食管癌细胞

 

随后，研究人员通过TCGA数据库分析发现，LINC01592在EC中大量表达，其表达水平与预后呈负相关。此外，研究发现引入外泌体抑制剂Annexin V或下调LINC01592可逆转M2-Exos显著抑制T细胞介导的肿瘤细胞杀伤。在涉及CD8+ T细胞与M2-Exos-EC细胞的体外共培养实验中。研究人员发现，引入外泌体抑制剂Annexin V或下调LINC01592逆转了CD8+ T细胞生长减缓，以及IFN-γ、TNF-α和Gzmb表达的降低。进一步的异种移植实验发现，与单独给药M2/sh-NC-Exos或M2-Exos的小鼠相比，给药M2/sh-1592#2-Exos或M2-Exos + Annexin V的小鼠表现出肿瘤体积的明显减少和CD8+蛋白水平的显著升高。以上结果表明，M2-Exos源性LINC01592负责诱导肿瘤的免疫逃避。

 

Fig3. M2-TAM源性外泌体LINC01592诱导肿瘤免疫逃逸

 

接着，研究人员探索了M2-TAMs源性外泌体LINC01592诱导肿瘤免疫逃逸的分子机制。结果发现，M2-TAMs分泌富含LINC01592的外泌体进入肿瘤细胞后，LINC01592直接结合E2F6，从而促进E2F6进入细胞核；LINC01592和E2F6的协同作用促进NBR1的转录水平。NBR1通过泛素结构域与泛素化蛋白MHC-I结合的增加介导了自噬溶酶体中MHC-I降解的增加和肿瘤细胞表面MHC-I表达的降低，进而导致肿瘤细胞逃避CD8+ CTL的免疫攻击。

 

Fig4. 作用机制示意图

 

最后，研究人员比较了不同分级EC和正常食管上皮（NEE）组织中LINC01592/E2F6/NBR1/MHC-I的表达水平。结果发现，LINC01592/E2F6/NBR1在癌组织中表达水平较高，尤其是在III + IV级。另一方面，MHC-I的表达表现出相反的模式。此外，LINC01592/E2F6/NBR1信号轴的表达水平之间存在正相关。而MHC-I的表达与LINC01592/E2F6/NBR1成反比。IF、FISH和IHC结果显示，LINC01592水平与E2F6/NBR1信号呈正相关。而MHC-I的表达与LINC01592/E2F6/NBR1成反比。表明LINC01592表达与临床EC恶性分级成正相关，同时也揭示了LINC01592表达与患者预后成负相关。

 

Fig5. LINC01592/E2F6/NBR1/MHC-I轴与临床进展的相关性

 

总之，本研究结果证明了M2-TAM源性外泌体LINC01592通过激活E2F6/NBR1/MHC-I信号通路增强了肿瘤对免疫系统的逃避。LINC01592的肿瘤促进作用通过破坏E2F6/NBR1/MHC-I信号轴而显著降低。有趣的是，抑制LINC01592导致肿瘤细胞表面MHC-I表达增强，从而增强CD8 + T细胞回输的功效。

 

原文链接：

https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-023-02871-2#Abs1

 

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