反义寡核苷酸（ASOs）是一种短的、化学合成的单链寡核苷酸，通过对其骨架和糖基进行修饰，可增加其稳定性、药理特性以及与靶标的结合，并通常具有较小的毒性。常用于细胞和动物体内基因功能研究以及ASO核酸药物的开发等。

 

经过化学修饰的ASOs可以通过多种作用机制发挥作用。常见的一种作用方式是与RNA结合，形成RNA&DNA杂合体，依赖于RNase H发挥作用，从而导致靶标mRNA的降解，主要适用于干扰细胞核内的lncRNA/circRNA/mRNA等。

 

（图片来源于：Vickers and Crooke, 2015）

 

锐博生物采用的寡核苷酸合成和修饰技术，可针对lncRNA/circRNA/mRNA不同序列设计高特异性ASO序列，所合成的ASO序列是经过特殊化学修饰的单链RNA&DNA杂合体，极大地提高了其在细胞及动物体内的稳定性，可同时干扰胞质和核内的靶标RNA，亦可用于体内实验。并且相对病毒载体，合成周期短，适于后续ASO核酸药的研发。

 

动物用ASO体内给药方法大致亦可分为系统给药和局部给药，系统给药一般为5-20nmol，局部给药为1-10nmol，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。

 

本期文章小编给大家更新了几篇关于动物用ASO给药方式的客户应用案例，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！

 

Journal of Hematology & Oncology（IF23.168）丨The LINC00623/NAT10 signaling axis promotes pancreatic cancer progression by remodeling ac4C modification of mRNA

 

动物模型：患者来源的异种移植(PDX)模型（分成2组，scrambled ASO、ASO-LINC00623）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：10 nmol

给药频率：每3天注射一次，持续36天

 

Fig1. 瘤内注射ASO-LINC00623显著降低了PDX模型中的肿瘤负担

 

参考文献：Feng Z, Li K, Qin K, et al. The LINC00623/NAT10 signaling axis promotes pancreatic cancer progression by remodeling ac4C modification of mRNA[J]. Journal of Hematology & Oncology, 2022, 15(1): 1-22.

 

 

   

应用案例2：

Journal of Hematology & Oncology（IF23.168）丨Super-enhancer hijacking LINC01977 promotes malignancy of early-stage lung adenocarcinoma addicted to the canonical TGF-β/SMAD3 pathway

 

研究模型：肺腺癌（将2×106 A549细胞皮下注射于4周龄小鼠背侧，以构建肺腺癌异种移植小鼠模型；将1×106 A549细胞尾静脉注射于4周龄小鼠体内，以构建肺转移模型）

动物模型：肺腺癌异种移植小鼠模型和肺转移模型（分为2组，scrambled、LINC01977 ASO）

给药方式：瘤内注射和尾静脉注射

给药剂量：10nmol

给药频率：每3天注射一次，连续4周

 

Fig2. 注射LINC01977-ASO可导致肿瘤体积更小，重量更轻，生长速度更慢，并抑制远端转移的形成

 

参考文献：Zhang T, Xia W, Song X, et al. Super-enhancer hijacking LINC01977 promotes malignancy of early-stage lung adenocarcinoma addicted to the canonical TGF-β/SMAD3 pathway[J]. Journal of Hematology & Oncology, 2022, 15(1): 1-21.

 

 

   

应用案例3：

Signal transduction and targeted therapy（IF18.187）丨Downregulation of MEIS1 mediated by ELFN1-AS1/EZH2/DNMT3a axis promotes tumorigenesis and oxaliplatin resistance in colorectal cancer

 

研究模型：结直肠癌（将3×106 CRC单细胞悬液皮下注射于4-5周龄BALB/c (nu/nu)裸雄鼠背侧，以构建CRC异种移植小鼠模型，当异种移植瘤体积达到100–150 mm3时，随机分为指定组）

动物模型：CRC异种移植小鼠模型（分为6组，分别注射PBS、奥沙利铂、ELFN1-AS1 ASO、GSK126、奥沙利铂+ ELFN1-AS1 ASO、奥沙利铂+ GSK126）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：10nM

给药频率：每周2次，持续4周

 

Fig3. 注射ASO-ELFN1-AS1可显著降低肿瘤体积，且与奥沙利铂联合使用可进一步抑制肿瘤生长

 

参考文献：Li Y, Gan Y, Liu J, et al. Downregulation of MEIS1 mediated by ELFN1-AS1/EZH2/DNMT3a axis promotes tumorigenesis and oxaliplatin resistance in colorectal cancer[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2022, 7(1): 1-13.

 

 

   

应用案例4：

Cancer Research（IF13.312）丨The macrophage-associated lncRNA MALR facilitates ILF3 liquid-liquid phase separation to promote HIF1α signaling in esophageal cancer

 

研究模型：食管癌（将从患者身上提取的新鲜ESCC肿瘤样本立即皮下接种到裸鼠的两侧。当成功建立的PDXs (P1)达到~ 500 mm3时，将肿瘤移植到其他小鼠(P2)。最后，使用P3移植小鼠来检测AGPG抑制剂的治疗效果）

动物模型：PDX肿瘤模型（分为2组：MALR inhibitor ASO组、scrambled组）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5 nmol

给药频率：每3天注射1次

 

Fig4. 注射MALR inhibitor显著降低肿瘤生长

 

参考文献：Liu J, Liu Z X, Li J J, et al. The macrophage-associated lncRNA MALR facilitates ILF3 liquid-liquid phase separation to promote HIF1α signaling in esophageal cancer[J]. Cancer Research, 2022.

 

 

   

应用案例5：

Cancer Research（IF13.312）丨MNX1-AS1 Promotes Phase Separation of IGF2BP1 to Drive c-Myc–Mediated Cell-Cycle Progression and Proliferation in Lung Cancer

 

研究模型：肺癌（将原发性NSCLC肿瘤样品切割成适当的小片段并接种到NCG小鼠的皮下空间中，以构建PDX模型）

动物模型：PDX模型（分为2组，分别注射MNX1-AS1 ASO、control）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5 nmol

给药频率：每3天注射1次

 

Fig5. 注射MNX1-AS1 ASO可导致肿瘤生长速度降低，肿瘤体积明显减小

 

参考文献：Zhu Q, Zhang C, Qu T, et al. MNX1-AS1 Promotes Phase Separation of IGF2BP1 to Drive c-Myc–Mediated Cell-Cycle Progression and Proliferation in Lung Cancer[J]. Cancer Research, 2022, 82(23): 4340-4358.

 

 

   

应用案例6：

Cancer Research（IF13.312）丨DLGAP1-AS2–Mediated Phosphatidic Acid Synthesis Activates YAP Signaling and Confers Chemoresistance in Squamous Cell Carcinoma

 

研究模型：鳞状细胞癌（将手术切除时获得的舌头和食管鳞状细胞癌（TSCC和ESCC）新鲜肿瘤标本切成60mm3小块，皮下植入6周龄NOD-Prkdcscid-Il2rgem1IDMO(NPI) 小鼠体内，一旦异种移植物达到大约1 cm3体积，肿瘤被解剖并重新移植到新一代小鼠中，以构建PDX模型）

动物模型：PDX模型（分为2组，NC和D-AS2 ASO）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5nmol

给药频率：每3天注射一次

 

Fig6. 体内给药D-AS2 ASO显著使鳞状细胞癌样品对DDP处理敏感

 

参考文献：Nan Y, Luo Q, Wu X, et al. DLGAP1-AS2–Mediated Phosphatidic Acid Synthesis Activates YAP Signaling and Confers Chemoresistance in Squamous Cell Carcinoma[J]. Cancer Research, 2022, 82(16): 2887-2903.

 

 

   

应用案例7：

Oncogene（IF8.756）丨Copy number amplification and SP1-activated lncRNA MELTF-AS1 regulates tumorigenesis by driving phase separation of YBX1 to activate ANXA8 in non-small cell lung cancer

研究模型：非小细胞肺癌（将原发性NSCLC肿瘤样品切割成适当的小片段并接种到NCG小鼠的皮下空间中，以构建PDX模型）

动物模型：PDX模型（分为2组，MELTF-AS1 ASO和control）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5nmol

给药频率：每3天注射一次

 

Fig7. 注射MELTF-AS1 ASO显著降低肿瘤生长

 

参考文献：Lu X, Wang J, Wang W, et al. Copy number amplification and SP1-activated lncRNA MELTF-AS1 regulates tumorigenesis by driving phase separation of YBX1 to activate ANXA8 in non-small cell lung cancer[J]. Oncogene, 2022, 41(23): 3222-3238.

 

更多动物用ASO应用案例持续更新中，敬请期待……