答：如果您希望以更加经济、安全和在更短实验周期内得到接近临床意义的实验结果，我们推荐您采用化学合成的in vivo siRNA。原因有：

（1）实验周期更短：化合合成siRNA实验操作简单，属于即用型体系，提交合成需求之后7-15天就可以打动物；而病毒类shRNA需要构建和筛选稳转细胞株，一般需要2个月，存在突变风险；

（2）安全性更好：化学合成siRNA属于寡核苷酸物质，安全性好；而病毒类对实验室安全级别有要求，可能导致过感染，实验过程中对操作者也有潜在危害。

（3）经济性更高：siRNA单次制备费用低，可灵活选择修饰和定制规格；病毒类定制费用昂贵，且定制方面灵活性差。

（4）更接近临床意义：以注射成瘤裸鼠为例，用肿瘤细胞注射构建肿瘤模型，成瘤后再注射in vivo siRNA，观察瘤体生长速度减慢或缩小，局部和全身给药操作简单，可用于原位癌和转移癌等已经扩散的癌症；而用病毒构建稳转细胞株接种动物，直接注射病毒感染细胞，容易导致较强的细胞毒性、肝毒性，特别不适用于原发癌和转移癌等已经扩散的癌症。

2. 动物用siRNA是否需要经过特殊修饰或制备？需要满足哪些条件？

答：由于动物体内生理环境非常复杂，动物用siRNA（又称in vivo siRNA）一般必须要提高其在体内的稳定性、半衰期、靶向性、纯度、药活性以及降低毒性等才可以用于体内实验，通常需要采用特殊的化学修饰或制备工艺以实现上述的目的。一般需要考虑三个因素：

① 稳定性：siRNA 易被酶降解，难以在体内持续发挥作用。

② 安全性：siRNA非特异作用引起“脱靶” 效应，外源RNA引发免疫反应。

③ 给药方式：必须提高 siRNA 生物利用度，有效作用于病变区域。

锐博生物采用自主专利siRNA化学修饰技术，原料全部采用高品质进口原料，通过严格质量检测控制体系，有效增强in vivo siRNA的稳定性，修饰不影响siRNA发挥作用，具有良好siRNA血清稳定性，并保持siRNA高效活性，更大限度降低siRNA对实验动物的毒性，最大限度满足给药要求，有效提高in vivo siRNA生物利用度，每批次质量均可溯源和提供完整的质量文件。

3. 动物实验用的siRNA有Standard in vivo或in vivo，PAGE in vivo，HPLC in vivo，三者有什么区别，该如何选择？

in vivo siRNA给药方式示意图

（如：口服、静脉注射、皮下注射、眼内注射、脑室内注射、肌肉注射、椎管内注射、皮内注射、淋巴腔注射、鼻腔注射、舌下注射、腹腔注射等）

 

口服给药：安全方便，经胃肠道吸收，这类化合物利用率最低；

腹腔给药：不存在胃肠道首过代谢，但依然存在肝脏首过代谢，生物利用率较高；

静脉给药：不存在吸收屏障和首过代谢屏障，生物利用度最高；

皮下注射和肌肉注射：经皮下和肌肉毛细管吸收，吸收没有静脉注射完全，但可避开胃肠道和肝脏首过代谢；

皮内注射：把siRNA药液注射入表皮和真皮之间，皮内注射吸收较慢；

脑内注射：精确注射药物进入大脑脑室或大脑特定组织，如海马体、黑质等，跳过药物吸收和血脑屏障，给药体积很小。

 

从生物利用度的角度，静脉给药最高，依次是静脉给药>腹腔>肌肉>皮下>口服。

5. 给药的推荐量是多大？给药频率是多少？

答：对于in vivo siRNA，推荐系统给药每次注射5~20nmol/20g体重，局部给药则需每次注射1~5nmol/20g体重，给药频率往往是一周2~3次，还可以根据实验研究目的灵活调整给药方案。

6. 局部给药的使用范围和作用效果如何？

答：局部给药（Local administration）的适用范围是浅表器官和组织，包括眼、肺、脑、肌肉、皮下组织、叶鞘组织等，是最直接最常用的一种导入方式，siRNA 导入效率较高，siRNA的用量少，锐博生物in vivo siRNA提供灵活的生产规格，原料全部采用高品质进口原料生产，采用严格工艺控制体系，质量均可溯源。

7. 系统给药的使用范围和作用效果如何？

答：系统给药（Systemic administration）的适用范围是具有广泛的组织分布的器官，包括心、肝、肾、肺等，主要是那些无法通过局部给药方式到达的靶位，如深入的内脏器官和一些散在分布的靶位（如淋巴细胞，转移性肿瘤细胞等），一般使用系统注射方式，用量一般较大。锐博生物in vivo siRNA提供大规格定制，原料全部采用高品质进口原料生产，采用严格的工作衣控制体系，单批次可达公斤级冻干粉，在批次质量控制上更具优势。

8. 如何观察检测in vivo siRNA在体内的分布？

答：通过标记上特殊荧光基团，能够准确分析动物模型中siRNA 给药情况并不断优化药物递送参数。荧光基团的发射光波长位于近红外波段，可显著降低体内自发荧光背景信号干扰。锐博生物为您提供Cy3/Cy5/FAM等荧光标记的in vivo siRNA，通过活体成像技术，即可清晰显示动物体内药物分布情况。

实验方法：

研究模型：结直肠癌（将两名CRC患者的新鲜肿瘤样本皮下植入小鼠背侧作为第一代（F0）。 一旦达到适当的体积，就将肿瘤切除，分成等份，并皮下植入裸鼠体内作为第二代（F1）。以构建结直肠癌PDX小鼠模型。当肿瘤变得可触及时，将荷瘤小鼠随机分为四组）
动物模型：结直肠癌PDX小鼠模型（分为4组，分别注射NFS1 siRNA+奥沙利铂、control siRNA+奥沙利铂、NFS1 siRNA+PBS、
control siRNA+PBS）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol
给药频率：/

主要研究结果：

1. 体外和体内结果表明，NFS1缺失与奥沙利铂协同作用通过增加细胞内活性氧（ROS）的水平来引发PANoptosis（细胞凋亡、坏死性凋亡、细胞焦亡和铁死亡）。
2. 基于奥沙利铂的氧化应激增强了NFS1丝氨酸残基的磷酸化水平，从而在奥沙利铂治疗期间以S293磷酸化依赖性方式阻止了PANoptosis。
3. 在肿瘤组织中发现了由MYC转录调节的NFS1高表达，并且与CRC患者的低生存率和对化疗的低敏感性有关。
 

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