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【更新20220315】动物用ASO案例应用策略解析丨含动物造模、实验处理、给药方式、给药剂量……
人阅读 发布时间：2022-03-21 11:10
反义寡核苷酸（ASOs）是一种短的、化学合成的单链寡核苷酸，通过对其骨架和糖基进行修饰，可增加其稳定性、药理特性以及与靶标的结合，并通常具有较小的毒性。常用于细胞和动物体内基因功能研究以及ASO核酸药物的开发等。
经过化学修饰的ASOs可以通过多种作用机制发挥作用。常见的一种作用方式是与RNA结合，形成RNA&DNA杂合体，依赖于RNase H发挥作用，从而导致靶标mRNA的降解，主要适用于干扰细胞核内的lncRNA/circRNA/mRNA等。
锐博生物采用国际先进的寡核苷酸合成和修饰技术，可针对lncRNA/circRNA/mRNA不同序列设计高特异性ASO序列，所合成的ASO序列是经过特殊化学修饰的单链RNA&DNA杂合体，极大地提高了其在细胞及动物体内的稳定性，可同时干扰胞质和核内的靶标RNA，亦可用于体内实验。并且相对病毒载体，合成周期短，适于后续ASO核酸药的研发。
动物用ASO体内给药方法大致亦可分为系统给药和局部给药，系统给药一般为5-20nmol，局部给药为1-10nmol，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。
小编之前已经给大家整理一些关于动物用ASO产品的客户应用案例，详情请见：
1、动物用ASO案例应用策略解析(20210616)丨含动物造模、实验处理、给药方式、给药剂量……
2、【更新】动物用ASO案例应用策略解析(20211022)丨含给药方式、给药剂量、动物造模、实验处理……
本期文章小编给大家更新了几篇关于动物用ASO给药方式的客户应用案例，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！
客户应用案例1：
Molecular Cancer（IF27.401）丨Long non-coding RNA LINC00680 functions as a ceRNA to promote esophageal squamous cell carcinoma progression through the miR-423-5p/PAK6 axis
研究模型：食管鳞状细胞癌（将KYSE510细胞 [3×105/ 100μl无菌PBS] 皮下注射于小鼠左侧，以构建食管鳞状细胞癌异种移植疾病模型，当肿瘤大小约为100mm3时，将小鼠随机分为两组，每组5只）
动物模型：ESCC异种移植裸鼠模型（分成2组，ASO NC组、ASO LINC00680组）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5 nmol
给药频率：每5天给药一次，连续注射8次
Fig2. ASO在体内抑制CRC细胞生长和转移
Fig3. 注射PKMYT1AR ASO可抑制体内肿瘤生长
Fig4. 将SNORD17 ASO注射到小鼠体内可抑制肝细胞癌皮下和原位肿瘤的生长
Fig5. 恩杂鲁胺条件下腹腔注射ASO-KDM4A-AS1可显著减少肿瘤体积
Fig6. 将KPRT4 ASO注射到小鼠体内明显抑制了肿瘤生长
经过化学修饰的ASOs可以通过多种作用机制发挥作用。常见的一种作用方式是与RNA结合，形成RNA&DNA杂合体，依赖于RNase H发挥作用，从而导致靶标mRNA的降解，主要适用于干扰细胞核内的lncRNA/circRNA/mRNA等。
（图片来源于：Vickers and Crooke, 2015）
锐博生物采用国际先进的寡核苷酸合成和修饰技术，可针对lncRNA/circRNA/mRNA不同序列设计高特异性ASO序列，所合成的ASO序列是经过特殊化学修饰的单链RNA&DNA杂合体，极大地提高了其在细胞及动物体内的稳定性，可同时干扰胞质和核内的靶标RNA，亦可用于体内实验。并且相对病毒载体，合成周期短，适于后续ASO核酸药的研发。
动物用ASO体内给药方法大致亦可分为系统给药和局部给药，系统给药一般为5-20nmol，局部给药为1-10nmol，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。
小编之前已经给大家整理一些关于动物用ASO产品的客户应用案例，详情请见：
1、动物用ASO案例应用策略解析(20210616)丨含动物造模、实验处理、给药方式、给药剂量……
2、【更新】动物用ASO案例应用策略解析(20211022)丨含给药方式、给药剂量、动物造模、实验处理……
本期文章小编给大家更新了几篇关于动物用ASO给药方式的客户应用案例，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！
客户应用案例1：
Molecular Cancer（IF27.401）丨Long non-coding RNA LINC00680 functions as a ceRNA to promote esophageal squamous cell carcinoma progression through the miR-423-5p/PAK6 axis
研究模型：食管鳞状细胞癌（将KYSE510细胞 [3×105/ 100μl无菌PBS] 皮下注射于小鼠左侧，以构建食管鳞状细胞癌异种移植疾病模型，当肿瘤大小约为100mm3时，将小鼠随机分为两组，每组5只）
动物模型：ESCC异种移植裸鼠模型（分成2组，ASO NC组、ASO LINC00680组）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5 nmol
给药频率：每5天给药一次，连续注射8次
Fig1. 将ASO LINC00680注射到裸鼠体内可显著抑制ESCC肿瘤生长
参考文献：Xue S, Zheng B, Cao S, et al. Long non-coding RNA LINC00680 functions as a ceRNA to promote esophageal squamous cell carcinoma progression through the miR-423-5p/PAK6 axis[J]. Molecular Cancer, 2022, 21(1): 1-18.
客户应用案例2：
Molecular Cancer（IF27.401）丨Tumor-suppressive circRHOBTB3 is excreted out of cells via exosome to sustain colorectal cancer cell fitness
研究模型：结直肠癌（将7×105 HCT116细胞重悬于100μl PBS中，接种于裸鼠脾脏，以构建CRC异种移植小鼠模型）
动物模型：CRC细胞肝转移异种移植小鼠模型（分为2组，ASO NC组、ASO-exo与ASO-cir联合处理组）
给药方式：尾静脉注射
给药剂量：20nmol（20nmol ASO NC、10 nmol ASO-exo+10 nmol ASO-cir）
给药频率：每3天注射一次，连续注射6次
给药剂量：20nmol（20nmol ASO NC、10 nmol ASO-exo+10 nmol ASO-cir）
给药频率：每3天注射一次，连续注射6次
Fig2. ASO在体内抑制CRC细胞生长和转移
参考文献：Chen C, Yu H, Han F, et al. Tumor-suppressive circRHOBTB3 is excreted out of cells via exosome to sustain colorectal cancer cell fitness[J]. Molecular Cancer, 2022, 21(1): 1-19.
客户应用案例3：
Molecular Cancer（IF27.401）丨LncRNA PKMYT1AR promotes cancer stem cell maintenance in non-small cell lung cancer via activating Wnt signaling pathway
研究模型：非小细胞肺癌（将1.5×106 A549细胞皮下注射4-6周龄雄性裸鼠体内，以构建NSCLC细胞异种移植小鼠模型，当异种移植瘤体积达到50 mm3时，随机分为指定组）
动物模型：NSCLC细胞异种移植小鼠模型（分为3组，ASO NC组、MYT1AR ASO #1组、MYT1AR ASO #2组）
给药方式：肿瘤周围注射
给药剂量：5nM
给药频率：每周2次，共注射6次
客户应用案例3：
Molecular Cancer（IF27.401）丨LncRNA PKMYT1AR promotes cancer stem cell maintenance in non-small cell lung cancer via activating Wnt signaling pathway
研究模型：非小细胞肺癌（将1.5×106 A549细胞皮下注射4-6周龄雄性裸鼠体内，以构建NSCLC细胞异种移植小鼠模型，当异种移植瘤体积达到50 mm3时，随机分为指定组）
动物模型：NSCLC细胞异种移植小鼠模型（分为3组，ASO NC组、MYT1AR ASO #1组、MYT1AR ASO #2组）
给药方式：肿瘤周围注射
给药剂量：5nM
给药频率：每周2次，共注射6次
Fig3. 注射PKMYT1AR ASO可抑制体内肿瘤生长
参考文献：He Y, Jiang X, Duan L, et al. LncRNA PKMYT1AR promotes cancer stem cell maintenance in non-small cell lung cancer via activating Wnt signaling pathway[J]. Molecular cancer, 2021, 20(1): 1-21.
客户应用案例4：
Cell Death & Differentiation（IF15.828）丨Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the progression of hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation
研究模型：肝细胞癌（将1×106肿瘤细胞皮下注射到4周大的BALB/c雄性裸鼠侧腹，以构建肝细胞癌异种移植小鼠模型；将携带HepG2-KO和HepG2-WT细胞的小鼠皮下肿瘤切成小块（1mm3）。将小鼠麻醉后，在上腹部和腹膜上切开一个切口。用棉签暴露肝右叶，然后用剪刀切开。将一块肿瘤移植到裸鼠的肝脏中（每组6只）。腹壁封闭。构建原位异种移植肿瘤模型）
动物模型：皮下异种移植小鼠模型和原位异种移植肿瘤模型（分为2组：SNORD17 ASOs组、NC ASOs组）
给药方式：瘤内注射或腹腔内注射
给药剂量：10 mg/kg
给药频率：每天注射1次，连续5天，然后停药1天，共18天
客户应用案例4：
Cell Death & Differentiation（IF15.828）丨Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the progression of hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation
研究模型：肝细胞癌（将1×106肿瘤细胞皮下注射到4周大的BALB/c雄性裸鼠侧腹，以构建肝细胞癌异种移植小鼠模型；将携带HepG2-KO和HepG2-WT细胞的小鼠皮下肿瘤切成小块（1mm3）。将小鼠麻醉后，在上腹部和腹膜上切开一个切口。用棉签暴露肝右叶，然后用剪刀切开。将一块肿瘤移植到裸鼠的肝脏中（每组6只）。腹壁封闭。构建原位异种移植肿瘤模型）
动物模型：皮下异种移植小鼠模型和原位异种移植肿瘤模型（分为2组：SNORD17 ASOs组、NC ASOs组）
给药方式：瘤内注射或腹腔内注射
给药剂量：10 mg/kg
给药频率：每天注射1次，连续5天，然后停药1天，共18天
Fig4. 将SNORD17 ASO注射到小鼠体内可抑制肝细胞癌皮下和原位肿瘤的生长
参考文献：Liang J, Li G, Liao J, et al. Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the progression of hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation[J]. Cell Death & Differentiation, 2022: 1-16.
客户应用案例5：
Oncogene（IF9.867）丨Targeting KDM4A-AS1 represses AR/AR-Vs deubiquitination and enhances enzalutamide response in CRPC
研究模型：去势难治性前列腺癌（将5×106 C4-2-EnzR细胞皮下植入6周龄雄性裸鼠体内，在第7天口服灌胃恩杂鲁胺，在第14天将小鼠分成两组）
动物模型：裸鼠异种移植小鼠模型（分为2组，分别注射PBS溶液、ASO-KDM4A-AS1）
给药方式：腹腔内注射
给药剂量：10 mg/kg
给药频率：在第14天注射1次
客户应用案例5：
Oncogene（IF9.867）丨Targeting KDM4A-AS1 represses AR/AR-Vs deubiquitination and enhances enzalutamide response in CRPC
研究模型：去势难治性前列腺癌（将5×106 C4-2-EnzR细胞皮下植入6周龄雄性裸鼠体内，在第7天口服灌胃恩杂鲁胺，在第14天将小鼠分成两组）
动物模型：裸鼠异种移植小鼠模型（分为2组，分别注射PBS溶液、ASO-KDM4A-AS1）
给药方式：腹腔内注射
给药剂量：10 mg/kg
给药频率：在第14天注射1次
Fig5. 恩杂鲁胺条件下腹腔注射ASO-KDM4A-AS1可显著减少肿瘤体积
参考文献：Zhang B, Zhang M, Yang Y, et al. Targeting KDM4A-AS1 represses AR/AR-Vs deubiquitination and enhances enzalutamide response in CRPC[J]. Oncogene, 2022, 41(3): 387-399.
客户应用案例6：
Cancer Letters（IF8.679）丨A feedforward circuit between KLF5 and lncRNA KPRT4 contributes to basal-like breast cancer
研究模型：乳腺癌（将重悬于Matrigel中的1×106 HCC1806细胞注射到乳腺脂肪垫中，以构建异种移植小鼠模型。当肿瘤达到约50 mm3时，将小鼠分为2组）
动物模型：原位异种移植小鼠模型（分为2组，ASO-NC和KPRT4 ASO）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol
给药频率：每3天注射一次，共注射6次
客户应用案例6：
Cancer Letters（IF8.679）丨A feedforward circuit between KLF5 and lncRNA KPRT4 contributes to basal-like breast cancer
研究模型：乳腺癌（将重悬于Matrigel中的1×106 HCC1806细胞注射到乳腺脂肪垫中，以构建异种移植小鼠模型。当肿瘤达到约50 mm3时，将小鼠分为2组）
动物模型：原位异种移植小鼠模型（分为2组，ASO-NC和KPRT4 ASO）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol
给药频率：每3天注射一次，共注射6次
Fig6. 将KPRT4 ASO注射到小鼠体内明显抑制了肿瘤生长
参考文献：Du G, Sun J, Li Z, et al. A feedforward circuit between KLF5 and lncRNA KPRT4 contributes to basal-like breast cancer[J]. Cancer Letters, 2022: 215618.
更多动物用ASO应用案例持续更新中，敬请期待……
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