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锐博生物总部位于广州市黄埔区广州开发区,是一家以核酸技术为核心,为基因功能、细胞生物学及药物研究提供产品与技术服务,以一体化核酸药 CDMO 服务为主导,致力于让新一代核酸药从概念走向商业化的国家火炬计划重点高新技术企业,是中国核酸行业的领军企业之一,拥有国家级博士后科研工作站。公司立足于基础生命科学与医学研究,创始人由国家重大人才工程入选者和诺贝尔生理/医学奖获得者领衔,以国际化视野和技术平台实力,提供高品质的寡核酸 Oligo 合成修饰、CRISPR-Cas9、RNAi、非编码 RNA、细胞分析、外泌体提取、DNA 提取、PCR 扩增、qRT-PCR 试剂盒及引物等,提供高内涵细胞成像及筛选、载体构建、动物实验、高通量测序、生信分析、RNA 体外转录、外泌体检测、qPCR 检测等技术服务,提供闻名业界的核酸药 GMP 生产 CDMO 服务。通过跨学科、多平台、上下游贯通的综合技术优势,赢得了国内外客户的信赖和赞誉。公司申请专利71项,其中已授权专利 21 项。“锐博生物RiboBio”是中国高品质核酸产品代名词之一,为国内外超过 5000 家机构提供产品或服务,客户 SCI 文章累计超过 25,000 多篇,合作客户包括诺贝尔奖得主实验室、知名科研机构和全球制药公司,锐博生物是亚洲知名的寡核酸原料药生产企业之一,2016年获得中国药监局颁发的寡核酸原料药生产许可证,现已跻身于全球核酸药 CDMO 的知名企业行列。锐博生物建立了与国际接轨的大规模cGMP生产基地,正在打造国际领先的大规模寡核酸 CMO 基地。锐博生物推动国内外核酸科学与技术的交流与合作,连续多年承办代表行业风向标的中国核酸国际论坛(CNAF)和非编码RNA与表观遗传学研究交流会,获批建立国家级博士后科研工作站,承担多项国家及省市重点科研项目。锐博生物致力于提供国际一流的核酸产品与服务,构建国际一流的合作平台与伙伴关系,培养国际一流的智慧型创新人才,为不断满足未来生命科学与医学研究及转化的需求而贡献力量。公司秉承“以创新求发展,以品质铸未来,以诚信待客户”的发展理念,追求“创新永不停”!
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Nature:RNA甲基化是RNA结构“开关”

人阅读 发布时间:2015-03-04 16:44

       2月26日出版的Nature,报道了芝加哥大学关于m6A修饰通过改变RNA结构来影响RNA-蛋白互作过程的最新研究成果。

  在RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(N6-methyladenosine,m6A)是高等生物RNA上含量最为丰富的一种修饰形式。这种修饰会参与到很多转录后调控过程中,与多种生理功能有关,是一类极为重要的表观修饰。

  本项研究中,研究者首先在一个与肺癌转移相关的lncRNA——MALAT1的茎环结构上发现了一个m6A修饰位点——2577-A/m6A,该位点修饰状态会改变数种核酸酶对MALAT1的消化能力。RNA pull down确认,2577-m6A位点会增强一种名叫HNRNPC的蛋白在多聚尿嘧啶结构处的结合能力,该蛋白会通过结合新生mRNA多聚尿嘧啶区域影响其靶点的稳定性、剪切、运输及翻译过程。研究者将这个修饰位点称为m6A开关(m6A-switch)。

  此后,研究者选择HEK293T细胞,通过两个实验在全转录组范围内验证m6A开关是否在其他转录本中广泛存在。第一个实验为CLIP+二维薄层色谱(CLIP-2dTLC),该实验将CLIP与TLC实验相结合,发现在HNRNPC结合的RNA区域附近,m6A/A比例明显更高,且这些区域对m6A抗体亲和性也更强。接下来再通过PAR-CLIP+meRIP-Seq,在全转录组范围确定HNRNPC结合区域附近m6A具体位置。HNRNPC PAR-CLIP-meRIP-Seq分析表明,m6A主要集中于GRACH motif(RRACH的一个子集),HNRNPC的多聚尿嘧啶结合域和GRACH域分布在50nt范围内,且m6A主要分布于内含子中,这也与之前发现的HNRNPC主要结合于初级新生转录本的现象一致。

CLIP-2dTLC示意图

PAR-CLIP-meRIP示意图

MALAT1的PAR-CLIP-meRIP结果,红色箭头表示2577-A/m6A位点。

    为了了解m6A缺陷对RNA-HNRNPC互作的影响,研究者又使用敲除了甲基转移酶METTL3和METTL14的细胞进行PAR-CLIP实验,结果表明RNA-HNRNPC互作被明显减弱。若将细胞内METTL3、METTL14和HNRNPC同时敲除,有接近1000个包含m6A开关的转录本出现变化,GO分析表明这些转录本所对应的基因与细胞增殖等生物过程有关。除了转录水平上的变化,当METTL3、METTL4和HNRNPC同时被沉默时,包含m6A开关的转录本的剪切形式也出现变化,HNRNPC/METTL3共沉默会造成258个外显子水平变化,HNRNPC/METTL14共沉默则会造成245个外显子水平变化,且这些外显子主要集中于m6A开关附近,也表明m6A最容易影响邻近外显子剪切形式。

沉默HNRNPC、METTL3、METTL14时arhgap5基因转录情况

本项研究所确认的m6A功能示意图

    以上这些实验结果说明,转录后的m6A修饰可以通过调控RNA-HNRNPC互作来影响编码以及非编码RNA的结构,从而进一步影响核内基因转录及成熟过程,这可能是由于m6A在影响HNRNPC与RNA结合能力的同时,还会进一步招募其他的辅助因子,例如YTH结构域蛋白等,这些因子也都会对直接识别m6A并影响RNA结构。

  本项研究表明m6A通过控制RNA-蛋白互作来影响mRNA和lncRNA的转录后调控,并进一步影响一些重要的生物学过程,对于RNA表观修饰研究具有重要意义。

  相关文献:Liu N, Dai Q, Zheng G, et al. N6-methyladenosine-dependent RNA structural switches regulate RNA-protein interactions[J]. Nature, 2015, 518(7540): 560-564.

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