In vivo siRNA最关键的问题就是siRNA稳定性及给药策略，适当的化学修饰是解决siRNA稳定的重要方法之一。锐博生物研发的genOFFTM in vivo siRNA，采用特殊的化学修饰方式，大大提高了siRNA的血清稳定性，并保持了siRNA的高效活性；通过采用国际先进的处理方法，能够最大限度降低对实验动物的毒性。

 

In vivo siRNA给药方法大致分为系统给药（如静脉给药、腹腔给药等）和局部给药（如皮下注射，玻璃体给药，鞘内给药等）。siRNA系统给药每次注射5~20nmol/20g体重，局部给药则需每次注射1~5nmol/20g体重, 给药频率往往是一周2~3次，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。

 

首先需要根据动物模型和实验方案，确定给药量和给药次数，然后计算出实验所需的总用量。需要根据不同的器官来选择给药方法，而给药量因不同给药方法和实验目的而异。如肝脏、肾脏、肌肉等常用静脉注射（系统给药）；而皮下肿瘤则常用到瘤内注射（局部给药）。

 

局部给药（Local administration）

适用范围：浅表器官和组织，包括眼、肺、脑、肌肉、皮下组织、叶鞘组织等。

特点：最直接最常用的导入方式，siRNA 的导入效率较高，用量少，siRNA 能很快被吸收。因此，genOFFTM in vivo siRNA 在局部注射的应用中更有优势。

 

系统给药（Systemic administration）

适用范围：siRNA 具有广泛的组织分布，包括心、肝、肾、肺等。

特点：一些无法通过局部给药方式到达的靶位，如深入的内脏器官和一些散在分布的靶位（如淋巴细胞，转移性肿瘤细胞等），一般使用系统注射方式。

 

本期文章小编给大家更新了几篇关于in vivo siRNA给药方式的客户应用案例，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！

 

   

应用案例1：

Cell Death & Differentiation（IF12.4）丨DNA 5mC and RNA m6A modification successively facilitates the initiation and perpetuation stages of HSC activation in liver fibrosis progression

 

疾病模型：肝纤维化（将16只6周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为两组，两组小鼠均通过腹腔注射10% CCl4 5 ml/kg，每周2次，连续4周，以建立肝纤维化模型）

动物模型：肝纤维化模型（分为2组，分别为CCl4 + siCON、CCl4 +siYTHDF1）

给药方式：弹丸式注射/尾静脉注射

给药剂量：10nmol

给药频率：每周两次，连续4周

 

Fig1. 注射YTHDF1 siRNA显著减弱了CCl4诱导的小鼠体重减轻和肝胶原过度生成

 

参考文献：Feng Y, Guo S, Zhao Y, et al. DNA 5mC and RNA m6A modification successively facilitates the initiation and perpetuation stages of HSC activation in liver fibrosis progression[J]. Cell Death & Differentiation, 2023, 30(5): 1211-1220.

 

 

   

应用案例2：

Redox Biology（IF11.4）丨Pathologically high intraocular pressure induces mitochondrial dysfunction through Drp1 and leads to retinal ganglion cell PANoptosis in glaucoma

 

疾病模型：青光眼（通过将8周龄野生型C57BL/6J小鼠的眼内压提高到120 mmHg，并维持45 min来建立小鼠ph-IOP模型）

动物模型：ph-IOP小鼠模型（分为3组，分别注射ph-IOP、ph-IOP+Drp1-siRNA、 negative control）

给药方式：玻璃体内注射

给药剂量：2 nmol/eye

给药频率：构建ph-IOP模型前72h通过玻璃体进行注射，注射1次

 

Fig2. 通过玻璃体内注射siRNA对Drp1进行体内抑制可挽救ph-IOP诱导的视网膜神经节细胞泛凋亡

 

参考文献：Zeng Z, You M, Fan C, et al. Pathologically high intraocular pressure induces mitochondrial dysfunction through Drp1 and leads to retinal ganglion cell PANoptosis in glaucoma[J]. Redox Biology, 2023, 62: 102687.

 

 

   

应用案例3：

Redox Biology（IF11.4）丨Translocator protein 18 kDa regulates retinal neuron apoptosis and pyroptosis in glaucoma

 

动物模型：ph-IOP大鼠模型（分为6组，分别为ph-IOP、ph-IOP+miR-1839 agomir (Ago)、ph-IOP+miR-1839 antagomir (Anta)、ph-IOP+Ago+Ier2 siRNA (dIer2)、ph-IOP+Anta+dIer2、ph-IOP+dIer2+TSPO-siRNA (dTSPO)）

给药方式：玻璃体内注射

给药剂量：2 nmol/eye

给药频率：在解剖显微镜下通过玻璃体内注射，注射1次

 

Fig3. 沉默TSPO可通过进一步抑制ph-IOP诱导的GCL细胞损失，增强Ier2敲低对RGCs的保护作用

 

参考文献：Zeng Z, You M, Rong R, et al. Translocator protein 18 kDa regulates retinal neuron apoptosis and pyroptosis in glaucoma[J]. Redox Biology, 2023, 63: 102713.

 

 

   

应用案例4：

Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF11.3）丨TNFAIP2 confers cisplatin resistance in head and neck squamous cell carcinoma via KEAP1/NRF2 signaling

 

疾病模型：头颈部鳞状细胞癌（以6周龄C57BL/6小鼠为实验对象，连续给予含有50 mg/ml 4NQO的饮用水16周，然后给予正常饮用水6周，建立诱导的HNSCC模型）

动物模型：HNSCC小鼠模型（分为4组，分别注射si-control、cisplatin、si-Tnfaip2、cisplatin + si-Tnfaip2）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5 nM

给药频率：每4天注射一次，共4周

 

Fig4. 注射si-Tnfaip2导致肿瘤病变面积减少

 

参考文献：Xu T, Yang Y, Chen Z, et al. TNFAIP2 confers cisplatin resistance in head and neck squamous cell carcinoma via KEAP1/NRF2 signaling[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2023, 42(1): 190.

 

 

   

应用案例5：

Cancer Letters（IF9.7）丨LINC00978 regulates metabolic rewiring to promote the malignancy of glioblastoma through AKR1B1

 

疾病模型：胶质母细胞瘤（将LN229细胞以1×105细胞/μL浓度悬浮于DMEM中，4周龄雄性裸鼠(5只/组)颅内注射5 μL细胞悬液，建立原位肿瘤模型）

动物模型：原位GBM异种移植模型（分为2组，分别注射scrambled siRNA、CamK-A siRNA）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：/

给药频率：每10天注射一次，共注射4次

 

Fig5. 注射CamK-A siRNA导致肿瘤异种移植体积明显更小，显著抑制体内细胞增殖

 

参考文献：Meng M, Yang L, Zhou H, et al. LINC00978 regulates metabolic rewiring to promote the malignancy of glioblastoma through AKR1B1[J]. Cancer Letters, 2023: 216277.

 

 

   

应用案例6：

Cancer Letters（IF9.7）丨The feedback loop of AURKA/DDX5/TMEM147-AS1/let-7 drives lipophagy to induce cisplatin resistance in epithelial ovarian cancer

 

动物模型：PDX小鼠模型（分为4组，分别注射Saline+Cisplaitn+siNC、Saline+VX-680+siNC、Saline+Cisplaitn+siTMEM147-AS1、Saline+VX-680+siTMEM147-AS1）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5nmol

给药频率：每3天注射一次，共21天

 

Fig6. TMEM147-AS1体内siRNA和VX-680的组合使EOC对PDX小鼠模型中顺铂治疗敏感

 

参考文献：Shao Y, Li H, Wu Y, et al. The feedback loop of AURKA/DDX5/TMEM147-AS1/let-7 drives lipophagy to induce cisplatin resistance in epithelial ovarian cancer[J]. Cancer Letters, 2023, 565: 216241.

 

 

   

应用案例7：

Cell Death & Disease（IF9.0）丨LncRNA LINC00969 promotes acquired gefitinib resistance by epigenetically suppressing of NLRP3 at transcriptional and posttranscriptional levels to inhibit pyroptosis in lung cancer

 

疾病模型：肺癌（将5周龄雄性小鼠原位注射相同数量的PC9/GR细胞，以建立异种移植物模型）

动物模型：异种移植肿瘤模型（分为4组，分别注射control + siNC、gefitinib + siNC、control + si-LINC00969、gefitinib + si-LINC00969）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5nmol

给药频率：每4天注射一次，共4周

 

Fig7. 注射si-LINC00969组小鼠肿瘤体积明显减小，吉非替尼治疗后肿瘤体积进一步减小

 

参考文献：Dai J, Qu T, Yin D, et al. LncRNA LINC00969 promotes acquired gefitinib resistance by epigenetically suppressing of NLRP3 at transcriptional and posttranscriptional levels to inhibit pyroptosis in lung cancer[J]. Cell Death & Disease, 2023, 14(5): 312.

 

 

   

应用案例8：

Cell Death & Disease（IF9.0）丨LncRNA MALAT1 promotes growth and metastasis of head and neck squamous cell carcinoma by repressing VHL through a non-canonical function of EZH2

 

疾病模型：头颈部鳞状细胞癌（将5×105个SCC15细胞注射到5周龄BALB/c雄性裸鼠的脚背，以建立异种移植小鼠模型）

动物模型：异种移植肿瘤模型（分为2组，分别注射NC、si-MALAT1）

给药方式：瘤内注射

给药剂量：5 nmol/20 g

给药频率：每4天注射一次，共12次

 

Fig8. 注射si-MALAT1显著抑制异种移植物的肿瘤生长

 

参考文献：Duan Y, Yue K, Ye B, et al. LncRNA MALAT1 promotes growth and metastasis of head and neck squamous cell carcinoma by repressing VHL through a non-canonical function of EZH2[J]. Cell Death & Disease, 2023, 14(2): 149.

 

 

   

应用案例9：

Molecular Therapy-Nucleic Acids（IF8.8）丨Chemically modified small interfering RNA targeting Hedgehog signaling pathway for rheumatoid arthritis therapy

 

疾病模型：类风湿性关节炎（第0天在DBA/1小鼠尾根部皮下注射用50 μL完全弗氏佐剂乳化的牛II型胶原蛋白100 μg作为初次免疫。第21天，小鼠接受不完全弗氏佐剂乳化的牛II型胶原加强免疫，以建立关节炎模型）

动物模型：CIA小鼠模型（分为4组，分别为normal control、CIA control、si-Scr-Chol、si-S1A3-Chol）

给药方式：关节内注射

给药剂量：250 nmol/kg·bw

给药频率：每周1次，连续8周

 

Fig9. 注射胆固醇偶联的化学修饰siRNA改善CIA小鼠关节炎进展并维持步态功能

 

参考文献：Lin L, Zhu S, Huang H, et al. Chemically modified small interfering RNA targeting Hedgehog signaling pathway for rheumatoid arthritis therapy[J]. Molecular Therapy-Nucleic Acids, 2023, 31: 88-104.

 

 

   

应用案例10：

The Journal of Headache and Pain（IF7.4）丨Trace amine-associated receptor 1 regulation of Kv1. 4 channels in trigeminal ganglion neurons contributes to nociceptive behaviors

 

动物模型：电刺激上矢状窦周围硬脑膜诱导的偏头痛小鼠模型（分为2组，分别为Kv1.4-siRNA、NC-siRNA）

给药方式：三叉神经节内注射

给药剂量：3 ul

给药频率：针尖终止于TG内侧，药物/试剂在5分钟内将3μl体积缓慢注射到TG内

 

Fig10. TG内给药Kv1.4-siRNA后导致机械灵敏度显著增加，进一步施用1 nmol酪胺显着增加了NC-siRNA组的机械疼痛敏感性，而对Kv1.4-siRNA组的机械疼痛敏感性没有加性作用

 

参考文献：Zhang Y, Wang H, Sun Y, et al. Trace amine-associated receptor 1 regulation of Kv1. 4 channels in trigeminal ganglion neurons contributes to nociceptive behaviors[J]. The Journal of Headache and Pain, 2023, 24(1): 1-18.

 

更多动物用siRNA应用案例持续更新中，敬请期待……