转染miR-3188 mimics、inhibitor到细胞，EdU试验观察。红色细胞为增殖的细胞。

这个功能背后的机制是……

miR- 3188的过表达能下调c-JUN和CCND1，p-PI3K和p-AKT的表达水平，同时增强p21和p27；有趣的是敲除miR-3188 后，5-8F细胞出现了相反的效果，且加入miR-3188 mimic后能恢复此现象，表明miR-3188通过抑制PI3K/AKT及下游的c-JUN和G1/S过渡信号来抑制细胞生长。

找miRNA靶基因很重要

TargetScan和RNA杂交演算推测mTOR是miR-3188的靶标，并通过了研究者的体外实验、对移植瘤的免疫组化实验、荧光素酶报告基因实验得到验证。

mTOR是靶基因？证明看看

转 染mTOR到miR-3188过表达的NPC细胞，进行MTT、EdU检测，发现mTOR能增强细胞增殖；过表达mTOR还能挽救miR-3188引起的 5-FU增敏作用，结合siRNA实验（下图），可得出mTOR是miR-3188的直接靶点，是造成细胞生长抑制与诱导NPC对5-FU敏感的关键。

转染si-mTOR到3种细胞后，Western blot检测内源PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、 CCND1和c-JUN的蛋白表达情况，结果与miR-3188过表达效果一致

转录调控机制研究， GO!

相 关基因这么多，从何下手？研究者使用UCSC、PROMO和TFSEARCH生物信息分析软件，分析miR-3188的转录起始位点上游3-kb区域，发 现包含了3个c-JUN结合位点。于是研究者敲降c-JUN，进行qPCR实验，发现miR-3188表达显着增加，说明c-JUN是miR-3188的 上游调节基因；综合EMSA、ChIP实验证明3个结合位点都是有效的。

研究结束了？别忘了通路

FOXO1 被报道诱导PI3K/AKT信号通路，于是研究者探究他对NPC细胞的影响，发现它能调控NPC细胞增殖和细胞周期。通过miRNA芯片，分析得包括含 miR-3188在内的82条miRNA因为FOXO1过表达而显著下调。随后通过实验，研究者得出FOXO1通过PI3K/AKT/c-JUN信号通路 诱导miR-3188表达。

miR- 3188表达与FOXO1的表达呈正相关，而与mTOR、c-JUN的表达呈负相关；miR-3188对NPC的作用主要是通过负反馈环实现：miR- 3188是FOXO1信号的下游效应器并在NPC细胞中参与FOXO1诱导的生长抑制；miR-3188直接靶向mTOR从而跟FOXO1一样阻碍 PI3K/AKT调节活动，尤其是下游细胞因子c-JUN和p-mTOR，进而影响细胞周期，抑制细胞生长；但同时PI3K/AKT会通过c-JUN与 miR-3188启动子区的结合来负反馈调节miR-3188的表达。
 

本研究所使用的siRNA、miRNA mimic / inhibitor、EdU试剂，均为锐博生物提供

原文：Zhao M,et al. miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through a FOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR-p-PI3K/AKT-c-JUN.Nat Commun. 2016 Apr 20;7:11309.